Cerebrospinal fluid challenges for the diagnosis of herpes simplex infection in the central nervous system / Desafios do exame do líquido cefalorraquidiano para o diagnóstico de infecção por herpes simplex no sistema nervoso central

Abstract Herpes simplex virus (HSV) is a cause of a severe disease of the central nervous system (CNS) in humans. The demonstration of specific antibodies in the cerebrospinal fluid (CSF) may contribute to the retrospective neurological diagnosis. However, the commercial immunological tests for HSV infection are for use in serum samples. Objective: The aim of the present study was to adapt a commercial kit anti-HSV IgG used for serum samples to be performed with a CSF sample. Methods: Forty CSF specimens from 38 patients with suspected CNS HSV infection were serially diluted for detecting anti-HSV IgG by enzyme immunoassay (EIA). The same samples were also analyzed with the polymerase chain reaction (PCR). Results: The sensitivity of EIA test for HSV was 5% (dilution 1:40) and 65% (dilution 1:2) in CSF, and HSV DNA PCR was 15%. The combined analysis of EIA (dilution 1:2) and PCR increased the sensitivity up to 72.5%. The inflammatory CSF was associated with positive HSV PCR. Conclusions: We demonstrated the importance to adapt serological anti-HSV IgG EIA test for CSF assays to increase the accuracy of the analysis, considering the low concentration of specific antibodies in CSF.

Resumo O vírus herpes simples (HSV) é um dos agentes causadores de uma doença grave no sistema nervoso central (SNC) em humanos. A detecção de anticorpos específicos no líquido cefalorraquidiano (LCR) pode contribuir para o diagnóstico neurológico retrospectivo. Entretanto, os testes imunológicos comerciais são para uso em amostras de soro. Objetivo: Adaptar um kit comercial sorológico anti-HSV IgG para ser utilizado no de LCR. Metodos: Quarenta amostras de LCR de 38 pacientes com suspeita de infecção por HSV no SNC foram diluídas pesquisa de anticorpos anti-HSV IgG pelo método imunoenzimático (EIA). Além disso, as mesmas amostras também foram analisadas por reação em cadeia da polimerase (PCR). Resultados: A sensibilidade do teste EIA para o HSV consistiu em 5% (diluição 1:40) e 65% (diluição 1:2) no LCR, e o PCR do DNA do HSV, 15%. A análise combinada de EIA (diluição 1:2) e PCR aumentou a sensibilidade para 72,5%. Houve associação entre presença do LCR inflamatório e PCR positiva para HSV. Conclusões: Demonstramos a importância na adaptação previa do teste sorológico anti-HSV IgG EIA para ensaios do no LCR, a fim de aumentar a acuracia da análise, considerando a baixa concentração de anticorpos específicos no LCR.

Diagnóstico da aspergilose invasiva:Aplicação das Técnicas de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e Ensaio Imunoenzimático de Detecção da Galactomanana (EIA-GM®) / Diagnosis of invasive aspergillosis: Application of Polymerase Chain Reaction Techniques (PCR) and Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Detectionof Galactomannan (EIA-GM®)

Introdução: a aspergilose invasiva (IA) é uma infecção fúngica grave causada por espécies do gênero Aspergillus e acomete principalmente pacientes leucêmicos,diabéticos e aqueles receptores de transplante de células-tronco, que apresentem neutropenia. Os esporos dos fungos que colonizam o epitélio pulmonar podem invadir as células endoteliais de revestimento e o acesso vascular e, assim, disseminar-se paraoutros órgãos através do sangue. A elevada mortalidade da doença está relacionada à imunossupressão grave, à rápida progressão da infecção e, principalmente, à ausência de um diagnóstico precoce e eficiente. Portanto, o diagnóstico na fase inicial da infecção é adequado, proporcionando uma terapia mais eficaz, o que pode reduzir a taxa de mortalidade da doença. Objetivo: o presente estudo teve em vista avaliar a aplicabilidadeda técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) no auxílio do diagnóstico de AI, em comparação com os resultados gerados pelo ensaio imunoenzimático de galactomanana (EIA-GM®), este já validado comercialmente. Métodos: foram analisadas 245 amostras de pacientes tratados no hospital Santa Casa de Belo Horizonte. Entre essas amostras, 16% (N = 39) foram positivos nos testes EIA-GM®. Em seguida, essas 39amostras positivas foram analisadas pela técnica de PCR. Resultados: de acordo com os resultados, a técnica de PCR apresentou taxa de 97,44% de sensibilidade, 97,96% de acurácia e 100% de especificidade, quando comparada ao método EIA-GM®. Conclusão:a técnica de PCR pode auxiliar no diagnóstico da AI, sempre associando os seus resultados à clinica do paciente e aos testes de imunoensaios.

Introduction: invasive aspergillosis (AI) is a serious fungal infection caused by species of the genus Aspergillus that primarily affects leukemic and diabetic patients and those recipients of stem cell transplants, which have neutropenia. The fungi spores that colonize the lung epithelium may invade the endothelial cell lining and vascular access and thus, spread to other organs through the blood. The high mortality of the disease is related tosevere immunosuppression, rapid infection progression, and especially lack of an early and efficient diagnosis. Therefore, the diagnosis in the initial infection phase is beneficial,providing a more effective therapy that can reduce the disease?s mortality rate. Objective:this study aimed at evaluating the applicability of the polymerase chain reaction (PCR) cheganin assisting the diagnosis of AI compared to the resultsgenerated by galactomannan enzyme immunoassay (EIA-GM®) that is already commercially validated. Methods: 245 samples from patients treated in the Santa Casa de Belo Horizonte hospital were analyzed. Among these samples, 16% (N = 39) were positive in EIA-GM®tests. Subsequently, these 39 positive samples were analyzedby PCR. Results: According to the results, the PCR technique showed 97.44% sensitivity, 97.96% accuracy, and 100% specificity compared to EIA-GM®. Conclusion:the PCR technique may aid in the diagnosis of AI,always associating the results to the patient's clinicaland immunoassay tests.

Estudo de homogeneidade dos soros utilizados em controle de qualidade interno de testes imunodiagnósticos de HIV/Aids / AidsHomogeneity study of the internal quality control sera for immunodiagnosis of HIV/AIDS

Introduction: The present study reports the data from the first homogeneity assessment of samples composing the serum panels produced at the Immunology Center of Instituto Adolfo Lutz, São Paulo. These samples have been distributed to the public laboratories and those partaking in the Brazilian Unified Health System, and to the participants in the Internal Quality Control Program for human immunodeficiency virus (HIV) antibody (Ab) testing. Objective: To assess the homogeneity of serum samples in panels from different lots for HIV/acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) immunodiagnosis by using the statistical method to ensure quality of the reference material. Method: Sera homogeneity was evaluated by means of enzyme-linked immunoassay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA) for detection of HIV Ab, and the one-way analysis of variance was employed for analyzing the data. No statistically significant differences were found among the several serum vials. Conclusion: The sera dispensed in the vials were homogeneous in the respective lots...

Introdução: No presente estudo estão descritos os resultados das primeiras análises feitas sobre a avaliação da homogeneidade das amostras componentes de painéis de soros produzidos no Centro de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz e distribuídos aos laboratórios públicos e conveniados ao Sistema Único de Saúde e participantes do Programa de Controle de Qualidade Interno para imunodiagnóstico de vírus da imunodeficiência humana/síndrome da imunodeficiência adquirida (HIV/AIDS). Objetivo: Avaliar a homogeneidade das amostras de soro componentes de painéis de diferentes lotes para imunodiagnóstico de HIV/Aids por meio de método estatístico para garantir a qualidade do material de referência. Material e método: A homogeneidade das amostras de soro foi avaliada por meio de enzyme-linked immunoassay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA) para detecção de anticorpos anti-HIV, e os resultados foram submetidos à análise de variância fator único. Não foram encontradas diferenças significativas entre os resultados obtidos para os diversos frascos de soro. Conclusão: As amostras distribuídas nos frascos foram homogêneas entre si nos respectivos lotes...

Comparison of nuclear grade and immunohistochemical features in situ and invasive components of ductal carcinoma of breast / Comparação do grau nuclear e perfil imunoistoquímico nos componentes in situ e invasivo de carcinoma mamário

PURPOSE:To compare the prognostic and predictive features between in situ and invasive components of ductal breast carcinomas. METHODS:We selected 146 consecutive breast samples with ductal carcinoma in situ (DCIS) associated with adjacent invasive breast carcinoma (IBC). We evaluated nuclear grade and immunohistochemical expression of estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR), human epidermal growth factor receptor 2 (HER2), cytokeratin 5/6 (CK5/6), and epidermal growth factor receptor (EGFR) in both components, in situ and invasive, and the Ki-67 percentage of cells in the invasive part. The DCIS and IBC were classified in molecular surrogate types determined by the immunohistochemical profile as luminal (RE/PR-positive/ HER2-negative), triple-positive (RE/RP/HER2-positive), HER2-enriched (ER/PR-negative/HER2-positive), and triple-negative (RE/RP/HER2-negative). Discrimination between luminal A and luminal B was not performed due to statistical purposes. Correlations between the categories in the two groups were made using the Spearman correlation method. RESULTS:There was a significant correlation between nuclear grade (p<0.0001), expression of RE/RP (p<0.0001), overexpression of HER2 (p<0.0001), expression of EGFR (p<0.0001), and molecular profile (p<0.0001) between components in situ and IBC. CK 5/6 showed different distribution in DCIS and IBC, presenting a significant association with the triple-negative phenotype in IBC, but a negative association among DCIS. CONCLUSIONS: Our results suggest that classical prognostic and predictive features of IBC are already determined in the preinvasive stage of the disease. However the role of CK5/6 in invasive carcinoma may be different from the precursor lesions.

OBJETIVO: Comparar características prognósticas e preditivas entre os componentes in situ e invasivo de carcinomas ductais da mama. MÉTODOS: Selecionamos 146 amostras mamárias consecutivas com carcinoma ductal in situ (CDIS) associado com carcinoma invasivo (CI) adjacente. Avaliamos grau nuclear e a expressão imunoistoquímica de receptor de estrogênio (RE), receptor de progesterona (RP), receptor do fator de crescimento epidérmico humano 2 (HER2), citoqueratina 5/6 (CK5/6) e o receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) em ambos componentes, in situ e invasor, e a porcentagem de células marcadas pelo Ki-67 no componente invasivo. CDIS e CI foram classificados nos tipos moleculares, determinados pelo perfil imunoistoquímico, como luminal (RE/RP-positivo/HER2-negativo), triplo-positivo (RE/RP/HER2-positivo), HER2-puro (RE/RP-negativo/HER2-positivo) e triplo-negativo (RE/RP/HER2-negativo). A discriminação entre luminal A e Luminal B não foi feita por motivos estatísticos. Correlações entre as categorias dos dois grupos foram feitas pelo método de correlação de Spearman. RESULTADOS: Houve significante associação entre grau nuclear (p<0,0001), expressão de RE/RP) (p<0,0001), superexpressão de HER2 (p<0,0001), expressão de EGFR (p<0,0001) e perfil molecular (p<0,0001) entre os componentes in situ e invasivo. CK5/6 mostrou distribuição distinta em CDIS e CI, apresentando significante associação com o fenótipo triplo-negativo em CI, mas uma associação negativa ente os CDIS. CONCLUSÕES:Nossos resultados sugerem que as características prognósticas e preditivas clássicas dos CI estão já determinadas no estágio pré-invasivo da doença. Entretanto, o papel da CK5/6 no carcinoma invasivo pode ser diferente daquele das lesões precursoras.

Introdução da reação em cadeia da polimerase em tempo real no algoritmo de testes laboratoriais para o diagnóstico de infecção por HTLV-1 e HTLV-2 / Use of the real-time polymerase chain reaction in the HTLV-1 and HTLV-2 infections diagnostic testing algorithm

Em vista das dificuldades encontradas no diagnóstico de infecção por vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 e 2 (HTLV-1 e HTLV-2) no Instituto Adolfo Lutz (IAL) de São Paulo, foi proposto o presente estudo que objetivou avaliar o valor do cut-off dos testes de triagem sorológica e os algoritmos de testes laboratoriais, dando ênfase ao emprego da reação em cadeia da polimerase (PCR) como teste confirmatório. Do total de 3.271 amostras de sangue provenientes da rotina diagnóstica dos anos de 1998 a 2010: (a) 2.312 amostras de soro (1998-2006) foram empregadas para estabelecer o melhor valor de cut-off para os ensaios imunoenzimáticos (EIAs) usando a análise ROC (receiving operating characteristics); (b) 313 amostras de sangue (2009) foram analisadas por algoritmo de duas coletas seqüências de sangue; (c) 73/959 amostras de sangue reagentes na triagem sorológica (2007-2010) foram empregadas no estudo comparativo de sensibilidade e custo dos testes confirmatórios de Western blot (WB), PCR convencional (tax e pol) e PCR em tempo real (pol). As PCRs foram otimizadas usando DNA extraído de linhagens celulares infectadas por HTLV-1 (C91-PL) e por HTLV-2 (BBF) e realizada pesquisa de gene da albumina humana como controle endógeno. Os resultados da análise ROC mostraram que um ajuste no valor do cut-off dos EIAs de 3ª geração aumentou a especificidade desses ensaios em 7,8%, sem alterar significativamente a sua sensibilidade. O algoritmo de coleta seqüencial de sangue se mostrou inadequado sendo mais apropriada a coleta única em tubo contendo anticoagulante. Os resultados do ensaio confirmatório de WB mostraram que este foi mais sensível (90,56%) do que a PCR convencional (77,36%) e a PCR em tempo real (79,25%), provavelmente pela pequena carga proviral de HTLV-1 e HTLV-2 presente no sangue, principalmente de portadores assintomáticos. Todavia, as técnicas de PCR se mostraram úteis na elucidação de amostras com padrão indeterminado à...

Introdução da reação em cadeia da polimerase em tempo real no algoritmo de testes laboratoriais para o diagnóstico de infecção por HTLV-1 e HTLV-2 / Use of the real-time polymerase chain reaction in the HTLV-1 and HTLV-2 infections diagnostic testing algorithm

Em vista das dificuldades encontradas no diagnóstico de infecção por vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 e 2 (HTLV-1 e HTLV-2) no Instituto Adolfo Lutz (IAL) de São Paulo, foi proposto o presente estudo que objetivou avaliar o valor do cut-off dos testes de triagem sorológica e os algoritmos de testes laboratoriais, dando ênfase ao emprego da reação em cadeia da polimerase (PCR) como teste confirmatório. Do total de 3.271 amostras de sangue provenientes da rotina diagnóstica dos anos de 1998 a 2010: (a) 2.312 amostras de soro (1998-2006) foram empregadas para estabelecer o melhor valor de cut-off para os ensaios imunoenzimáticos (EIAs) usando a análise ROC (receiving operating characteristics); (b) 313 amostras de sangue (2009) foram analisadas por algoritmo de duas coletas seqüências de sangue; (c) 73/959 amostras de sangue reagentes na triagem sorológica (2007-2010) foram empregadas no estudo comparativo de sensibilidade e custo dos testes confirmatórios de Western blot (WB), PCR convencional (tax e pol) e PCR em tempo real (pol). As PCRs foram otimizadas usando DNA extraído de linhagens celulares infectadas por HTLV-1 (C91-PL) e por HTLV-2 (BBF) e realizada pesquisa de gene da albumina humana como controle endógeno. Os resultados da análise ROC mostraram que um ajuste no valor do cut-off dos EIAs de 3ª geração aumentou a especificidade desses ensaios em 7,8%, sem alterar significativamente a sua sensibilidade. O algoritmo de coleta seqüencial de sangue se mostrou inadequado sendo mais apropriada a coleta única em tubo contendo anticoagulante. Os resultados do ensaio confirmatório de WB mostraram que este foi mais sensível (90,56%) do que a PCR convencional (77,36%) e a PCR em tempo real (79,25%), provavelmente pela pequena carga proviral de HTLV-1 e HTLV-2 presente no sangue, principalmente de portadores assintomáticos. Todavia, as técnicas de PCR se mostraram úteis na elucidação de amostras com padrão indeterminado à análise pelo WB, sendo os ensaios sorológicos e moleculares complementares. Concluindo, em vista da PCR em tempo real ser um teste rápido, seguro, de menor custo e de fácil execução, ele pode ser aplicado como primeiro teste confirmatório de infecção por HTLV-1 e HTLV-2 seguido do WB (AU).

Taking into account the difficulties in diagnosing the human T-cell lymphotropic virus type 1 and type 2 (HTLV-1 and HTLV-2) in Instituto Adolfo Lutz of São Paulo, the present study was conducted aiming at evaluating the cut-off values of screening enzyme immunoassays (EIAs) and the tests algorithms, emphasizing the use of polymerase chain reaction (PCR) as confirmatory assay. Of 3,271 blood samples routinely analyzed from 1998 to 2010: (a) 2,312 serum samples (1998-2006) were assessed for the best cutoff value by using the receiving operating characteristics analyses (ROC); (b) 313 blood samples (2009) were tested following the algorithm which employs two sequential blood collection, and (c) 73/959 blood samples (2007-2010) showing reactive results on screening testing were employed for comparative analysis of serologic (Western blot ­ WB) and molecular confirmatory assays [PCR (tax and pol) and real time PCR (pol)]. The PCRs were optimized using the cells lines infected with HTLV-1 (C91-PL) and HTLV-2 (BBF), and the human albumin gene. The ROC analysis showed that an adjustment of the cut-off value in the third generation EIAs increased their specificity in 7.8%. The use of the sequential blood collection algorithm for serological diagnosis was completely inefficient and a unique blood collection in an anticoagulantcontaining tube seems to be the most appropriate. The WB confirmatory assay resulted to be more sensitive (90.56%) than the standard PCRs (77.36%) and the real-time PCR (79.25%), probably owing to the low HTLV-1 and HTLV-2 proviral load in asymptomatic carriers' blood. However, the PCRs were able in elucidating the samples with indeterminate WB profile, thereby standing the serologic and molecular assays as complementary tests. In conclusion, because of the low cost, rapidity, reliability and easiness to perform, the real-time PCR could be used as the first confirmatory assay for performing the HTLV-1 and HTLV-2 diagnosis, followed by the WB technique (AU).